غربالگری مولکولی سراشیا مارسیسنس تولیدکننده پروتئاز خارج سلولی از محیط های مختلف غرب مازندران

سرایشوپپتیداز نوعی آنزیم پروتئولیتیک است که بیشتر از یک دهه است که برای کاربرد کلینیکی در دسترس می باشد و می تواند به عنوان یک جایگزین مناسب برای عوامل ضد التهابی غیر استروئیدی به کار رود. هدف از این مطالعه جداسازی سویه هایی از سراشیا مارسیسنس با قابلیت تولید فعالیت پروتئولتیک از محیط طبیعی غرب مازندران می باشد. روش کار: در این مطالعه 150 نمونه محیطی از مناطق غنی از پروتئین تحت شرایط استاندارد نمونه گیری شد. پس از رقیق سازی ایزوله هایی با فعالیت پروتئازی بر روی محیط skim milk agarشناسایی و جداسازی گردید. سپس ایزوله ها مورد ارزیابی ساختاری قرار گرفتند و از ایزوله های گرم منفی استخراجdna به روش سیلیکا ژل صورت گرفت و با استفاده از پرایمر اختصاصی ژن 16s rdna گونه سراشیا مارسیسنس شناسایی گردید. به منظور تعیین توالی محصولات pcr به شرکت ماکروژن کره جنوبی فرستاده شد. ایزوله های سراشیا مارسیسنس، مجددا در محیط براث حاوی منبع پروتئین کازئین کشت و پروتئاز ترشح شده، رسوب و تغلیظ گردید. رسوب تغلیظ شده آنزیم برای ارزیابی وزن ملکولی نسبی و فعالیت آنزیمی sds-page سنجش آنزیمی گردید. نتایج: نتایج نشان داد که از میان 150 نمونه، 60 نمونه دارای هاله پروتئولتیک و گرم منفی بودند که با استفاده از تکنیک pcr اختصاصی تنها 2 ایزوله سراشیا مارسیسنس شناسایی گردید. نتیجه sequensing همولوژی 98% را نشان داد که نشان دهنده سویه جدیدی از باکتری بود.این سویه در ncbi با نام serratia marcescens 424 به ثبت رسید. قطر هاله پروتئولتیک ایزوله n 32 mm و 12 30 mm در دمای 37 درجه سانتیگراد بعد از 48 ساعت اندازه گیری شد. وزن ملکولی پروتئین ترشحی ایزوله nبه طور تقریبی kda 52 و نمونه 12،kda 70-60 و فعالیت آنزیمی نمونه ی n، u/ml 80/199 و نمونه 12، u/ml 29/155 تعیین گردید.